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1 技術(shù)簡(jiǎn)介
免疫組庫(kù)(immunerepertoire,IR):是指某個(gè)個(gè)體在任何特定時(shí)間點(diǎn)其循環(huán)系統(tǒng)中所有功能多樣性B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的總和;BCR和TCR一般由可變區(qū)(V區(qū))、多變區(qū)(D區(qū))、連接區(qū)(J區(qū))、恒定區(qū)(C區(qū))構(gòu)成,V(D)J區(qū)域在遺傳過(guò)程中發(fā)生重排或重組,形成大量不同的組合形式,導(dǎo)致BCR和TCR基因序列多樣性極其豐富,使得機(jī)體能應(yīng)對(duì)多樣的病原微生物入侵。
傳統(tǒng)免疫組庫(kù)測(cè)序利用的是多重PCR或5’ RACE方法,但都存在一定的局限性,如多重PCR擴(kuò)增法范圍局限在CDR3區(qū),5’ RACE 法只能獲得單鏈全長(zhǎng)信息等。單細(xì)胞免疫組庫(kù)打破了傳統(tǒng)免疫組庫(kù)測(cè)序的局限,不但可以將TCR/BCR雙鏈完美匹配,實(shí)現(xiàn)成對(duì)的重鏈和輕鏈(B細(xì)胞)或α和β鏈(T細(xì)胞)的全長(zhǎng)測(cè)序,還可以細(xì)化到單細(xì)胞水平,并同時(shí)獲得表達(dá)譜信息。
2 技術(shù)原理
單細(xì)胞免疫組庫(kù)測(cè)序(5’scRNA + TCR/BCR)是以 10x Genomics 平臺(tái)的液滴微流控技術(shù)為基礎(chǔ)在單個(gè)細(xì)胞層面同時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)情況和 TCR/BCR 序列多樣性進(jìn)行檢測(cè)的測(cè)序技術(shù),最終,可以獲得兩個(gè)數(shù)據(jù)文庫(kù),分別是單細(xì)胞 5 ’端基因表達(dá)文庫(kù)和免疫組庫(kù)(V (D) J 文庫(kù))。
圖1. 10X 單細(xì)胞免疫組庫(kù)技術(shù)原理
3 樣品準(zhǔn)備
4 生物信息學(xué)分析流程
5 主要結(jié)果展示(只展示標(biāo)準(zhǔn)分析部分,具體項(xiàng)目具體分析,詳細(xì)請(qǐng)咨詢銷(xiāo)售)